【英文题名】 Protein Engineering and Expression of the Endoglucanase Ⅱ from Trichoderma Reesei
【作者中文名】 秦玉琪;
【导师】 曲音波;
【学位授予单位】 山东大学;
【学科专业名称】 微生物学
【学位年度】 2008
【论文级别】 博士
【网络出版投稿人】 山东大学
【网络出版投稿时间】 2008-11-25
【关键词】 瑞氏木霉; 内切葡聚糖酶Ⅱ; 糖基化; 饱和突变; 定向进化; 最适pH; 转化;
【英文关键词】 Trichoderma reesei; EndoglucanseⅡ; Glycosylation; Saturation Mutagenesis; Directed Evolution; Optimum pH; Transformation;
【中文摘要】 纤维素酶已经被成功应用于纺织、造纸、食品、饲料工业,并且随着生物能源工业的出现,其市场潜力越来越大。当纤维素酶被用于纺织、造纸等纤维加工工业中时,往往需要接触一些偏碱性的环境。而大多真菌纤维素酶由于在高pH下活力丧失严重,其应用受到诸多限制。许多研究者希望通过蛋白质工程的手段改造纤维素酶并获得其最适pH和酶活力均有所上升的突变体酶。 酿酒酵母由于其转化和表达的高效性是一种良好的分子改造的宿主。许多来源于真菌的纤维素酶已经被表达于酿酒酵母中,并获得了具有活性的重组酶蛋白。内切葡聚糖酶Ⅱ(EGⅡ)是瑞氏木霉中最主要的内切酶之一,删除EGⅡ的瑞氏木霉其内切酶活性丧失了55%以上。在本实验室前期的工作中,从使用酿酒酵母H158构建的瑞氏木霉cDNA文库中获得了内切葡聚糖酶Ⅱ的基因eg2,并利用的定向进化方法筛选到一个最适pH有所提高的突变体。 通过进一步研究酿酒酵母中表达的重组内切葡聚糖酶Ⅱ(rEGⅡ)的酶学性质和使用定向进化的手段提高其功能,可以进一步阐明酶的结构和其最适pH的关系。这不仅可使瑞氏木霉内切葡聚糖酶更好的应用于偏碱性环境,也为研究蛋白质的结构与功能的关系提供了有用的数据和信息...
【英文摘要】 At present,lignocellulose-degrading enzymes have been widely used in many industries such as textile,dyeing,pulp and paper,detergent,food.Therefore,they have huge market potentials.However,the cellulases derived from fungi have their highest activity at acidic pH.Once the pH value was above 6,their activities are greatly reduced and this largely limits the applications of fungal cellulases under neutral or alkaline condition,therefore,one of the goals in protein engineering for fungal cellulases is to...
【DOI】 CNKI:CDMD:1.2008.189070
【相同导师文献】 导师：曲音波 导师单位：山东大学 学位授予单位：山东大学
[1] 张志华.粗糙脉孢菌AS3.1602乙醇发酵的代谢研究[D]. 山东大学,2007
[2] 孙宪昀.斜卧青霉木质纤维素酶系的合成调控研究[D]. 山东大学,2007
[3] 马安周.纤维素酶吸附致钝特性研究及其改造策略[D]. 山东大学,2008
[4] 张秀红.溶源性发酵乳杆菌及其温和噬菌体的研究[D]. 山东大学,2006
[5] 沈煜.木酮糖激酶对酿酒酵母代谢工程菌木糖利用的影响及木糖异构酶基因的胞外表达[D]. 山东大学,2005
[6] 李从发.新型环氧化物水解酶筛选及其在手性合成中的应用[D]. 山东大学,2003
[7] 裴海燕.海绵固定化微生物除藻系统和溶藻细菌的分离鉴定及溶藻特征[D]. 山东大学,2005
[8] 季明杰.中药姜黄组分芳姜黄酮诱导肿瘤细胞凋亡的研究[D]. 山东大学,2005
[9] 陈静.槐糖脂产生菌的筛选及槐糖脂抑菌和抗肿瘤作用的研究[D]. 山东大学,2006
[10] 潘军.深海适冷菌Pseudoalteromonas sp.SM9913分泌的适冷蛋白酶MCP-01的基因克隆和自溶研究[D]. 山东大学,2005
