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本发明公开了一种珠状壳聚糖载体的制备及其用于酶固定化的方法。本发明采用有机相-水相两相分离法制备珠状壳聚糖，质量体积比0.1％-6.0％浓度的壳聚糖在有机溶剂中分散，采用酰基化试剂增加载体机械强度后制得珠状壳聚糖。采用戊二醛一步活化获得带有大量活泼醛基的壳聚糖珠，即可直接偶联蛋白质分子的氨基，制备固定化酶。该方法简单，适于工业生产。所制固定化酶活性好，机械强度高，稳定性好，价格便宜。