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本发明公开了一种青霉素酰化酶固定化载体的制备方法。本发明以表面活性剂作为分散剂，以乙烯基化合物为单体，采用反相悬浮技术进行交联聚合，从而获得青霉素酰化酶固定化载体。载体固定化青霉素酰化酶(IME)对青霉素G钾盐水解制备6-APA的表观酶活，可达125IU/g以上。本发明的方法所获得的含环氧基团聚合物珠状载体，表观酶活高，工艺过程简单，操作方便，原料价廉易得，易于工业化规模生产。