陈芳霞，陈鹏
西北农林科技大学 生命科学学院，陕西 杨凌 712100
陈芳霞，陈鹏. 热敏型核酸酶在毕赤酵母中的分泌表达及催化特性. 生物工程学报, 2016, 32(7): 991–995.
Chen FX, Chen P. Secretory expression and characterization of heat sensitive nuclease in Pichia pastoris. Chin J Biotech,
2016, 32(7): 991–995.
摘 要: 核酸酶在生物工程领域有着重要的应用价值。本研究在优化北极虾核酸酶 (Shrimp nuclease，SNU) 基因序列的基础上，构建SNU 的毕赤酵母分泌表达载体SNU-pPICZα A 并转化酵母，以高拷贝整合转化子为基础，优化酶表达的条件，并对该酶的催化特性进行分析，结果显示SNU 可在毕赤酵母SMD1168H 中高效分泌表达，最佳诱导表达条件为：培养基BMMY pH 6.0，甲醇浓度为1%，诱导时间为72 h，诱导后粗酶液比活力为1.4×105 U/mL。经过DEAE Sephadex 阴离子交换层析可纯化获得高纯度的目标蛋白，每升菌液可纯化15 mg目标蛋白，比活力达到6.291×106 U/mg，该酶表观分子量为50 kDa，PNGaseF 酶切证实该酶存在糖基化现象。
二价金属离子Ca2+、Mn2+、Co2+、Mg2+及还原剂DTT、β-ME 能显著地提高其水解活性，但Zn2+、Cu2+、SDS、高浓度NaCl 抑制该酶的活性，SNU 为Ca2+/Mg2+依赖型核酸酶。70 ℃处理10 min 可使该酶不可逆的失活。
