王水刚‘马燕林‘马建忠‘**马雪青2任海伟‘

1兰州理工大学生命科学与工程学院兰州730050

2中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点试验室国家口蹄疫参考试验室兰州730046)

摘要
采用RT-PC R法扩增马铃薯夏波蒂的。一淀粉酶成熟肤基因，将其亚克隆至毕赤酵母表达载

体pPIC9k上，Sac II线性化重组表达载体，电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞，构建重组酵母

GS 115 /pPIC9 k-amy，利用锥虫蓝法筛选获得高活性转化子(GSamyAS)，以终浓度为0. 5%甲醇诱

导该重组菌表达。一淀粉酶，通过Niz' -NTA agarose亲和层析纯化，并对其酶学性质进行研究。结

果表明:该酶的最适反应温度为450C , 40 } 500C酶活较稳定，保温50 min，残留相对活力达

92.6%;最适反应pH值为6. 0，并在pH 6. 0 } 7. 0范围内酶活保持稳定。Caz' , K+可促进酶反

应，以Caz'影响为最，相对酶活力提高到125 % ; Cuz' , Fez' , Fe3' , Znz+对该酶有显著抑制作用;

Mnz'，   Mgz+对酶有微弱抑制作用，Li' , Na+对酶活影响不大。

关键词α-淀粉酶 马铃薯 毕赤酵母 表达与纯化 酶学性质