荧光定量PCR技术，全基因合成/突变，基因表达，蛋白纯化

用Taqman方法对DNA/RNA进行Real Time PCR的定量测定或型的鉴定。

闪晶生物为您提供完整的Real Time PCR技术服务和咨询，详情如下：

服务要求：

1、请您提供新鲜的且尽量多的材料，或直接提供纯化好的总RNA或DNA（大于5ug/样品）。每份材料最少应提供100mg/样品。

2、请通过E-mail提供已知的全长因序列。

3、请提供详细背景资料：DNA/RNA来源、丰度等。

操作程序：

1、根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针；

2、提取DNA/RNA；

3、Real Time PCR，进行实验结果分析；

4、实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。

收费标准：

1、RNA提取费用：

小于20个样品：150元/个；

20－30个样品：120元/个；

30个以上样品：100元/个；

2、PCR反应费用：

一个指标每个样品为150元；

二个指标每个样品为240元；

三个指标每个样品为300元；

四个指标以上每个样品为80元/反应。

3、引物和探针序列设计：免费（客户只需提供genebank的ID号或指标名称）。

4、引物和探针合成费用：

引物合成元/bases；探针标记为1200元/条。2.00

5、内参引物探针：免费。

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全基因合成服务

在我们的实验工作中，如果采用一般实验手段无法得到目的基因时，可以进行实验室人工合成。闪晶公司提供全基因合成服务，具体情况如下。

1. 请将您需要合成的基因全序列以 E-mail 或传真的形式告知闪晶公司的业务员或闪晶公司的技术员。

2. 请说明实验的具体要求，如：使用何种酶切位点进行克隆以及需克隆于何种载体等。

1. 我们将对您需要合成的基因全序列进行分析，检查基因内部是否含有重复序列。根据序列的具体情况设 计合成方案并通过业务员或技术员给您报价。

2. 在得到您认可后我们将立即进行单链 Oligo DNA 合成、 DNA 片段拼接等工作，然后把全长基因克隆于载体 中，再通过 DNA 测序确认合成基因的正确性。

3. 测序结果如果发现有 错误位点，我们会采取相应的技术手段进行修复校对，保证整个序列的正确性。

4. 提供实验结果：包括实验操作规程、测序结果、测序彩色峰图、含有合成基因的质粒及含该质粒的菌体 ( 穿刺菌 ) 等。

通过实验方法可以有效地向目的基因片段中引入任何所需的 DNA 变异，包括碱基添加、删除、点突变等。

1. 请您通过业务员或技术员提供需要进行突变基因的全部详细序列；突变前序列请标注为： Wild sequence ；突变后序列请标注为： Mut sequence 。

2. 请提供突变基因克隆操作的详细背景资料，例如使用何种限制酶酶切位点、克隆于何种载体等。

3. 请说明实验的具体要求，详细情况请参考 “客户常问的几个问题”。

1. 具体联系方式请参考“客户常问的几个问题”。

2. 如您提供的模板序列为非闪晶公司的测序结果，我们将首先对模板进行测序并将与您沟通测序结果。

3. 根据突变方案设计合成突变引物，进行基因突变实验的 PCR 反应，克隆变异体。

4. 进行 DNA 测序验证突变序列的正确性。

5. 提供实验结果，包括实验操作规程、突变用引物、质粒变异体以及含有该质粒的菌种（穿刺菌）、测序结 果、测序彩色峰图等。

6. 1 kbp 以下的 DNA 片段克隆在普通载体上的单点突变的时间约需 10 天左右。

某基因在生物体内是否表达，往往可以通过 RT-PCR 的方法进行定性检测。并以 b -Actin 或 GAPDH 等看家基因作内参照，对其表达量进行半定量分析或者实时荧光 PCR 全定量分析。

1. 请您提供新鲜的且尽量多的材料（各种材料的 RNA 提取量请参照“总 RNA 的提取” ) ，或直接提供纯化好的 总 RNA （大于 5 m g/ 样品 ) 。

2. 请通过 E-mail 提供已知的全长基因序列。

3. 请提供尽可能详细的背景资料： RNA 来源、丰度等。

1. 根据基因序列设计扩增目的基因以及看家基因的引物。

2. 提取 RNA ，通过 OD 值测定对 RNA 样品进行定量。

3. RT-PCR 扩增目的基因及看家基因。

4. 产物进行琼脂糖凝胶电泳，分析结果。

5. 实验完成后，提供完整的实验操作规程、实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。


 

其它相关技术服务：
蛋白表达
荧光定量PCR技术服务
Western Blot技术服务DNA测序服务
定点突变(基因突变)
细胞培养
腺病毒包装
多克隆抗体制备
反转录试剂
RNA抽提试剂
TA克隆服务
 

上海闪晶分子生物科技有限公司

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