3 实验结果
3．l 木聚糖酶的热稳定性研究
3．1．l 干热处理对木聚糖酶活的影响
经过不同温度条件下的干热处理对木聚糖酶活的影响实验，得到实验结果如下：
表1 干热处理对木聚糖酶活的影响
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处理前 |
处理温度（℃）及相对酶活（％） |
|||
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酶活 |
65 |
75 |
85 |
95 |
|
100 |
105．57 |
98．26 |
81．10 |
55．15 |
从实验结果可以看出，该木聚糖酶对于处理温度不超过85℃时其耐干热处理的能力较强。
3.l.2 湿热处理时间对酶活的影响
表2 湿热处理时间对酶活的影响
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处理前酶活 |
处理时间（min）及相对酶活（％） |
|||
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2．5 |
5．0 |
7．5 |
10．0 |
|
|
100 |
83．10 |
78．40 |
48．20 |
34．62 |
在85℃下采用不同时间进行湿热处理得到结果如表2所示。
可以看出，湿热处理对酶活的影响同干热处理相比要大得多，这是由于在湿热处理条件下，更易使蛋白质变性。
3．2 木聚糖酶最适pH值的研究
可以发现，该木聚糖酶在pH值为5．00的条件下，酶活力最高，因此，可以确定该木聚糖酶的酶活测定的最适pH值为5．00。
3．3 木聚糖酶最适反应温度的研究
从实验结果中可以发现，反应温度对该木聚糖酶酶活的测定影响很大，在50℃时的相对酶活为100％，而在60℃时其相对酶活却仅为50℃时的23.35％。所以，我们选择木聚糖酶的最适反应温度为50℃。
3．4 木聚糖酶底物针对性实验
木聚糖酶是一种复合酶，含有多种酶蛋白组分，从已有的研究结果可以发现，能产生水聚精酶的微生物至少有20种，而且不同的微生物产生的木聚糖酶通常也是不同的，另外底物中作用成份含量及分子结构的不同，也必定会造成酶活测定的不一致。陆文清等人进行过底物对酶活测定的影响实验，他们选用燕麦木聚糖和桦木木聚糖作为底物，发现底物不同时测得木聚糖酶活相差很大。为此，我们进行了该木聚糖酶针对不同底物进行了酶活测定实验，结果如表3所示。
表3 不同底物对木聚糖酶活测定的影响
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作用底物 |
桦木木聚糖 |
燕麦木聚糖 |
|
相对酶活（％） |
100 |
87．97 |
实验结果资明：该本聚糖酶对于桦木木聚糖的针对性比燕麦木聚糖好。
3．5 不同金属离子对木聚糖酶酶活的影响
表4 不同离子或化合物对木聚糖酶活性的影响
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化合物 |
相对酶活（％） |
化合物 |
相对酶活（％） |
|
MgCl2·6H2O |
74.91 |
(NH4)2SO4 |
102.54 |
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CuSO4·5H2O |
33.55 |
KCl |
104.20 |
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NaCl |
102.40 |
MnSO4·7H2O |
61.17 |
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ZnSO4·7H2O |
78.86 |
FeSO4·7H2O |
99.49 |
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FeCl3·6H2O |
68.11 |
|
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可以看出， Mg2+、 Cu2+、Mn2＋、Zn2＋、Fe3＋对于木聚糖酶的活性有抑制作用，其中Cu2＋的抑制作用最强，酶活损失近70％，其次为Mn2＋、Fe3＋、Mg2＋、Zn2＋，酶活损失约21．l％～38．8％，Fe2+对木聚糖酶活影响不大；此外，Na+、K+及（NH4）2SO4对酶活性有一定的激活作用。
3．6 木聚糖酶反应进程曲线的测定
从图3木聚糖酶的反应进程曲线中可以看出，该水聚糖酶液添加量为0．2～1.0mL、时间为60min之内，反应进程曲线均呈线性，所以在这个范围内进行测定，求出的反应速度为最大反应初速度，这有利于酶活的正确测定。
同样地，以酶液添加量为横坐标，反应速度为纵坐标，可以作图得到木聚糖酶的酶浓度曲线如下：
由图4可以发现，该水聚糖酶在反应时间为60min范围之内时，线性关系良好，而在测定时间超过60min后，反应速度开始下降，因此，此浓度曲线从另一个方面也验证了上面的反应进程曲线。
3.7 木聚糖酶Km值的测定
米用Lineweaver-Burk法作图如下：
将直线延伸，可求得水聚糖酶的Km＝4.485（mg／mL）。
4 讨论
本文研究的该木聚糖酶最适pH值和最适温度与其他报道的木聚糖酶相近似，且耐热性能较好。经模拟制粒过程后（85℃、17％水分、处理2．5 min），仍保持较高的酶活（83．10%）。另外，Cu2+、Zn2+、Mn2+和Fe3+对本木聚糖酶有抑制作用；而Na+、K+及（NH4）2SO4对其酶活有一定的激活作用。
测得该本聚糖酶的Km值为4.485mg／mL，与其他来源的木聚糖酶相比，Km值较低，这说明，该木聚搪酶对木聚糖的亲和性较高。
从该木聚糖酶的特性看，动物肠道内的温度、pH值对其活性影响不大，而且能耐受制拉过程中的高温，这使其在动物饲料中的运用具有独特优势。
