副干酪乳杆菌β-葡萄糖苷酶的表达,纯化及酶学性质研究

 为了实现糖苷类物质的高效转化,将来源于副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)TK1501β-葡糖苷酶基因连接于表达载体pET28a(+)上,在E.coli BL21中表达,重组酶经镍离子亲和层析分离得到纯酶,其分子质量和比酶活分别为86.63kDa和675.56U/mg.最适作用温度和pH分别为30℃和6.5.Mg2+和Ca2+对β-葡糖苷酶酶活抑制作用最小,Cu2几乎使其丧失催化活性.其底物特异性较宽泛,对大豆异黄酮、栀子苷、水杨苷、七叶苷、虎杖苷、熊果苷均有降解作用.以β-pNPG为底物时,该酶的Km和Vmax分别为1.44mmol/L和58.32mmol/(L·s),催化系数kcat为3 982/s.结果 与分析表明,来源于副干酪乳杆菌TK1501 β-葡糖苷酶对水解大豆异黄酮和合成糖苷将会发挥重要作用.