许伟‘,2丁莉‘严明‘许琳
(1南京工业大学制药与生命科学学院南京
(2盐城工学院化学与生物工程学院盐城
210009
224051)
摘要为获得具有高热稳定性的木糖异构酶，运用基因工程技术，从嗜热栖热菌Thermus thermophilus HB8中克隆到嗜热木糖异构酶基因xyLA 0测序结果表明，该基因与GenBank数据库中相比271位的碱基A突变为G，导致氨基酸序列中N91 D突变。将该基因克隆到载体pET22b(十)，并在E. coli BL21( DE3 )中进行高效表达。通过热变性和强阴离子交换两步对该酶进行纯化，并对酶学性质进行了研究。结果表明，该酶最适温度为80 0C，最适pH为8.0,80℃下半衰期为225 min。在600C,pH7.5该酶的K。为15.20 mmol/L,从。二为69. 54 }},mol/min , k}.}，为50.62/s,
气t/Kp为3.33L/s } mmol。研究结果为嗜热木糖异构酶的进一步工业应用莫定了基拙。
关键词木糖异构酶 嗜热栖热菌 表达 纯化 酶学性质
中图分类号p814
