于潇潇，王琦，周烨，高仁钧，王英武
(吉林大学生命科学学院，分子酶学工程教育部重点实验室，长春130012 )
摘要从枯草芽抱杆菌(BaciLLus subtiLis 168)基因组中的ORF32230出发，通过氨基酸序列分析推测其可能为
酞基氨肽酶基因，并与典型的脯氨酸寡肽酶家族成员一致，含有2个独立的结构域，活性中心由催化三联体
丝氨酸一天冬氨酸一组氨酸(Ser-Asp-His)组成将BSU32230的基因片段与pET-21 a载体相连，转人BLP(DE3)
表达菌中，在0.5 mmol/L异丙基召-D一硫代半乳糖昔(IPT(劲存在及20℃条件下诱导表达该蛋白利用硫酸
馁沉淀与Ni亲和层析对BSU32230蛋白进行纯化，并通过实验证明该蛋白同时具有酯酶和肽酶2种活性该
酶最佳反应温度为50 0(;，最佳pH值为8. 0 , 40℃下半衰期约29 h，在pH =4 } 10范围内稳定该酶能够在
有机相中催化不对称Aldol加成反应，且反应产物的立体选择性较好(84.6% )
关键词 酰基氨肽酶;枯草芽孢杆菌;Aldol反应
中图分举号0629. R立献标志码A
