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基因工程的载体和工具酶

   日期:2011-01-27     来源:www.cnenzyme.com    作者:酶网    

2.T4DNA聚合酶的用途

(1)利用取代合成反应制备探针

(2)标记具有平末端的或具有3’-隐蔽末端的DNA片段

利用较强的3 ′→ 5 ′外切酶活性和 5′→3′聚合活性

(3)用于DNA序列分析

(四)逆转录酶(反转录酶)

逆转录酶 是一种依赖RNA的DNA聚合酶。

此酶首先是1970年从鼠白血病毒和劳氏肉瘤病毒中发现的。这两个课题组的论文都发在了同一期的《Nature》杂志上。

最普遍使用的是从鸟类骨髓母细胞瘤病毒(AMV)分离出来的。


活性:一种可以有效地将mRNA反转录成DNA的酶,其产物称为cDNA(complementary DNA).

主要用途是 将mRNA转录成cDNA以制备基因片段。

四、修饰性工具酶

(一)末端转移酶(terminal transferase)

l 末端转移酶是一类不依赖于DNA模板的DNA聚合酶。

l 特性:该类酶可以在没有模板链存在的情况下,将核苷酸连接到dsDNA或ssDNA的在3’-OH。特别是对于平末端的双链DNA末端加尾十分有用。

l 最常见的用途:给外源DNA片段及载体分子加上互补的同聚物尾巴,以创造黏性末端,便于重组。

(二) SI核酸酶(SI nuclease)

这是一种从米曲霉(Aspergillus oryzae)中分离的高度单链特异的外切酶。

活性:可以降解单链DNA或RNA或双链的单链区。

其主要用途有:

1. 在cDNA合成过程中,切开cDNA的发夹末端;

2. 载体构建过程中,切去DNA片段的单链尾巴,

形成平末端结构。

(三)碱性磷酸酶

从大肠杆菌中分离的细菌碱性磷酸酶(Bacterial Alkaline Phosphatase)简称BAP。

从小牛肠中分离的叫小牛肠碱性磷酸酶( Calf Intestinal Alkaline Phosphatase) ,简称CIP,用的广泛。

酶催功能:

脱磷酸作用,将单链或双链DNA或RNA5’-P转化成5’-OH。

其主要用途有:

⑴在用32P标记DNA 5′端之前,去除5′端的磷;

⑵在DNA重组技术中,去除DNA片段的5′磷酸,防止载体的自身环化,提高重组子比例。(中国酶制剂网 www.cnenzyme.com)

 
标签: 工具酶 载体
 
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